中藥青黛是由馬藍 Baphicacanthus cusia (Nees) Bremek.、菘藍 Isatis indigotica Fort.或蓼藍 Polygonum tinctorium Ait.等植物制成的加工品，具 有清熱解毒、涼血消斑、瀉火定驚的功效。青黛 可用于治療牛皮蘚、潰瘍性結(jié)腸炎[等炎癥性 疾病，以及治療慢性粒細胞性白血病。相關(guān)研 究表明，青黛中的靛玉紅成分主要起抗腫瘤、抗 氧化作用，用于治療慢性粒細胞性白血病；青 黛中的靛藍成分主要起抗菌作用。

1 儀器與試劑 

高效液相色譜儀(安捷倫)；二極管陣列檢測器 (日本日立公司)；BSA124S 型電子天平(賽多利斯 科學(xué)儀器北京有限公司，d=0.1 mg)；DK-S24 型電 熱恒溫水浴鍋(上海森信實驗儀器有限公司)； 精宏DHG-9140A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實 驗設(shè)備有限公司)；L550 型臺式低速大容量離心機 (湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司)；KQ3200DB 型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；臭 氧發(fā)生器(10 g·h?1 ，長沙暢青化工有限責(zé)任公司)。 馬藍Baphicacanthus cusia(Nees) Bremek.莖葉 (課題組種植)；純水(雙蒸水)；甲醇(色譜純、西隴 科學(xué)股份有限公司)；N,N-二甲基甲酰胺(DMF，分 析純，西隴科學(xué)股份有限公司)；靛玉紅(含量： 98.36%；成都曼斯特生物科技有限公司)；靛藍(含 量：98.09%；成都曼斯特生物科技有限公司)。 

2 方法與結(jié)果 

2.1 青黛 HPLC 方法學(xué)的建立

2.1.1 色譜條件 

色譜柱：依利特 YWG C18 (4.6 mm×200 mm，10 ?m)；流動相：甲醇-水(7∶ 3)；流速：1 mL·min?1 ；檢測波長：292 nm。 

2.1.2 對照品溶液的制備 

靛玉紅：精密稱取靛 玉紅對照品 2.5 mg，置于 100 mL 量瓶中，加 DMF 約 80 mL，超聲使其溶解，并用 DMF 定容，作為 靛玉紅貯備液。 靛藍：精密稱取靛藍對照品 5.0 mg，置于 50 mL 量瓶中，加 DMF 約 40 mL，超聲使其溶解， 并用 DMF 定容，作為靛藍貯備液。 

2.1.3 供試品溶液的制備 

精密稱取樣品 1.0 mg，置于 10 mL 量瓶中，加 DMF 約 8 mL， 超聲 30 min 使其溶解，并用 DMF 定容，作為供 試品溶液。 

2.1.4 線性關(guān)系考察 

精密吸取 2，4，6，8，10 mL 靛玉紅貯備液至 10 mL 量瓶中，加 DMF 稀釋至刻 度，搖勻，即得濃度分別為 5，10，15，20，25 μg·mL?1 的靛玉紅溶液。 精密吸取 1，2，3，4，5 mL 靛藍貯備液至 10 mL 量瓶中，加 DMF 稀釋至刻度，搖勻，即得濃度分 別為 10，20，30，40，50 μg·mL??1 的靛藍溶液。 按“2.1.1”項下色譜條件，進樣 10 μL，以靛 玉紅、靛藍溶液的濃度為橫坐標(biāo)(μg·mL??1 )，峰面 積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準曲線，其回歸方程分別為y 靛玉紅=51.717x?10.368，R2 =0.999 9；y 靛藍=47.477x+ 80.102，R2 =0.999 6。 

2.1.5 儀器精密度試驗 

取同一供試品溶液，按 “2.1.1”項下色譜條件，連續(xù)進樣 5 次，其峰面 積的 RSD 分別為靛玉紅 1.67%、靛藍 1.35%。 2.1.6 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，按 “2.1.1”項下色譜條件，在 0，2，4，8，12，24 h 分別精密量取 10 μL，進樣測定，其峰面積的 RSD 分別為靛玉紅 1.90%、靛藍 1.69%。 2.1.7 重復(fù)性試驗 取 5 份供試品溶液，按“2.1.1” 項下色譜條件進樣測定，5 份供試品溶液的靛玉紅 平均濃度為 8.21 μg·mL??1 ，RSD=1.86%；5 份供試 品溶液的靛藍平均濃度為 50.22 μg·mL??1 ，RSD= 0.97%。

3 討論 

青黛傳統(tǒng)炮制方法中加入石灰打靛，將馬藍 葉中吲哚苷、靛紅烷 B 等前體物質(zhì)在堿性環(huán)境下 轉(zhuǎn)化為靛藍、靛玉紅等有效成分，開發(fā)出 的新炮制工藝是通過酸水解和堿中和將前體物質(zhì) 轉(zhuǎn)化為靛藍、靛玉紅等有效成分，從而避免引入 石灰，使青黛產(chǎn)品品質(zhì)得到提高。中國藥典以靛 玉紅、靛藍作為青黛質(zhì)量內(nèi)控成分，分別以靛玉紅、靛藍含量為評價指標(biāo)，量化工藝參 數(shù)，確定定向生成靛玉紅、靛藍的工藝路線，分 別考察了通 O3 時間、鹽酸濃度、提取溫度、提取 時間等因素對青黛炮制工藝的影響。在此基礎(chǔ)上，通過 Box-Behnken 中心組合設(shè)計多因子響應(yīng)面試 驗研究分別建立定向生成靛玉紅、靛藍的炮制工 藝，采用非線性模型擬合，可信度較好，具有很 好的預(yù)測性，青黛的新炮制工藝也為青黛的炮制和綜合利用提供了理論依據(jù)和技術(shù)參考。

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