紫錐菊( Echinacea purpurea，EP) 是多年生草本 植物，屬松果菊屬植物，因頭狀花序很像松果而又得 名松果菊，原產(chǎn)于北美，于 19 世紀末被帶到歐洲，近 年在我國北京、上海、南京、湖南、山東等地相繼引種 成功。紫錐菊具有悠久的藥用歷史，常用于防治 感冒及上呼吸道感染。紫錐菊提取物含有一系列 不同的化學(xué)成分，包括烷基酰胺、咖啡酸衍生物類、苯 丙素類、多糖類和揮發(fā)油等，它們具有不同的生物學(xué) 效應(yīng)。

1 材料

1. 1 主要藥物與試劑

紫錐菊，采自山東省膠州試驗田; 硫酸，購自上海 沃凱生物技術(shù)有限公司; 石油醚、二甲苯，均購自天津 市富宇精細化工有限公司; 無水乙醇、氫氧化鈉，均購 自萊陽市康德化工有限公司; 氯仿、正丁醇，均購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司，以上試劑均為分析純。 DEAE－纖維素、Sephadex G－100，均購自北京索萊寶 科技有限公司。

1. 2 試驗動物

ICＲ 小鼠 40 只，體重 18～ 22 g，購自山東朋悅有限 公司，生產(chǎn)許可證: SCXK( 魯) 20140007，雌雄各半。在 標準實驗室條件下飼養(yǎng): 12 h 光照和 12 h 黑暗交替， 溫度為( 22±2) ℃，給小鼠充足的飲食和飲水。

1. 3 主要儀器

電子天平( 型號為 AL204) ，購自梅特勒－托利多 儀器 ( 上 海) 有 限 公 司; 恒溫鼓風(fēng)干燥箱 ( 型 號 為 精宏DHG-9146A) ，購自上海精宏實驗用品有限公司; 高 速萬能粉碎機( 型號為 FW－100) ，購自北京市永光明 醫(yī) 療 儀 器 廠; 紫外可見分光光度計 ( 型 號 為 UV1100) ，購自上海天美科學(xué)儀器有限公司; 冷凍干 燥機( 型號為 FD－1D－55) ，購自北京博醫(yī)康實驗儀 器有限公司; 電動耳腫打孔器( 型號為 YLS－25A) ，購 自濟南益延科技發(fā)展有限公司。

2 方法

2. 1 紫錐菊粗多糖的制備

參照參考的方法并進一步優(yōu)化。首先 將新鮮的紫錐菊烘干，放入粉碎機中粉碎成 2 cm 左 右后放入圓底燒瓶中，加入石油醚，回流提取 2 h，過 濾，去掉濾液，曬干; 然后取藥材加入 15 倍水浸泡至 泡透，80 ℃煎煮 2. 5 h，冷卻至室溫后過濾; 藥渣加入 15 倍水，煎煮 2. 5 h，合并煎煮液，提取液在 80 ℃ 下 濃縮至藥液比為 1 ∶ 1，靜置，棄去沉淀; 加入 4 倍量 無水乙醇醇沉，邊加邊攪拌，靜置 24 h，抽濾; 沉淀依 次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，冷凍干燥，將凍干后的多糖復(fù)溶于水中，配成 1. 5%多糖溶液，將溶液倒入 燒杯中，加入 Sevag( 體積比，正丁醇: 三氯甲烷= 1 ∶ 4) 試劑，溶液與 Sevag 試劑的比例為 3 ∶ 1，攪拌 2 h 后靜 置，上層為多糖溶液，中層為蛋白質(zhì)，下層為 Sevag 試 劑，棄掉中層和下層，在上層多糖溶液中加入新的 Sevag 試劑，重復(fù) 8 次，直至去掉所有蛋白質(zhì)，濃縮去掉 溶液中的有機試劑，將濃縮后的多糖冷凍干燥。

2. 2 紫錐菊純化多糖的制備

2. 2. 1 紫錐菊多糖 DEAE－纖維素色譜柱的純化

參照參考的方法并進行適當優(yōu)化。根據(jù)說 明書對 DEAE－纖維素進行前處理，即稱取 DEAE－纖 維素 100 g 于燒杯中，加入 10 倍純化水，攪拌均勻， 浸泡溶脹 24 h，去掉上清 液，裝 柱，用 純 化 水 平 衡 24 h。配 制 濃 度 為 0. 1 mg /mL 的 紫 錐 菊 多 糖， 4 000 r /min離心 10 min，經(jīng)超濾去除 色 素 后，過 膜 ( 0. 45 μm) 上樣，依次用純化水及 0. 1，0. 3 mol /L NaCl 梯度洗脫，用自動收集器( 流速為 2 mL /min) 每 5 min收集 1 管，共收集 50 管。每管用移液槍吸取 1 mL 收集液于試管中，加入 5%苯酚溶液 1 mL，然后 加入硫酸 5 mL，混勻，靜置冷卻后用紫外分光光度計 在 490 nm 下測定吸光度。分別合并 3 個吸收峰試管 中的液體，濃縮，透析后冷凍干燥，得到 3 個紫錐菊純 化多糖( EPPS－1、EPPS－2、EPPS－3) 。

2. 2. 2 紫錐菊多糖葡聚糖凝膠 G－100 色譜柱的純化

參照參考的方法并進行適當優(yōu)化。根 據(jù) 說 明 書 對 Sephadex G － 100 進 行 處 理，稱 取 Sephadex G－100 100 g 于燒杯中，加入適量超純水， 煮沸 2 h，冷卻后裝柱，平衡 24 h。將純化凍干得到的 多糖用純化水分別配制成濃度為 30 mg /mL 的溶液， 過膜后上樣，用純化水洗脫，流速為 0. 2 mL /min，每 10 min 收集 1 管，共收集 50 管。每管用移液槍吸取 1 mL 收集液于試管中，加入 5%苯酚溶液 1 mL，然后 加入硫酸 5 mL，混勻，靜置冷卻后用紫外分光光度計 在 490 nm 下測定吸光度。合并收集液，冷凍干燥。

3 結(jié)果與分析

與空白對照組比，地塞米松 組、 EPPS－1 組、EPPS－2 組、EPPS－3 組小鼠耳腫脹度均 顯著降低( P＜ 0. 05) ，地塞米松組小鼠耳腫脹度顯著 低于 EPPS－1、EPPS－2、EPPS－3 組小鼠的耳腫脹度 ( P＜0. 05) 。地塞米松組小鼠的耳腫脹抑制率顯著高 于 EPPS－1 組、EPPS－2 組、EPPS－3 組。EPPS－3 組 對小鼠耳腫脹的抑制率顯著高于 EPPS－1 組、EPPS－ 2 組。說明三種紫錐菊純化多糖中 EPPS－3 的抑炎 效果最好。EPPS－1、EPPS－2、EPPS－3 組小鼠 的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)與空白對照組均沒有顯著差異 ( P＞0. 05) ，地塞米松組小鼠的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)均 顯著低于空白對照組及 EPPS－1、EPPS－2、EPPS－3 組( P＜0. 05) 。

4 討論與結(jié)論

比較了 4 個不同濃度紫錐菊多糖對雞 脾淋巴細胞的增殖作用，結(jié)果表明，紫錐菊多糖具有 明顯的免疫增強作用。倪耀娣等研究了紫錐菊多 糖對傳染性法氏囊病病毒疫苗免疫雛雞外周血 T 淋 巴細胞亞群的影響，結(jié)果表明，紫錐菊多糖免疫增強 作用較強。C． Steinmüller 等研究了紫錐菊多糖對 環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫缺陷小鼠非特異性免疫的影響， 結(jié)果表明，紫錐菊多糖具有免疫增強活性。



 

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