糞腸球菌為革蘭陽性球 菌，在 外 界 環 境 中 的 生 存能力非常的強，屬于動物腸道內正常菌群，可作為 益生菌 用 于 調 節 腸 道 的 微 生 態。 中 國 農 業 部 ２０１７年公布的《允許使用的飼料添加劑品種目錄》 中，腸球菌作為一種飼料級微生物添加劑被成功收錄。

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石河子大學動物科技學院傳染 病實驗 室 保 存 的 致 羔 羊 腦 膜 炎 糞 腸 球 菌 （命 名 為 ＸＪ１）。

體重１８ｇ～２２ｇ健康昆明小鼠 （雌雄各半），由新疆醫科大學實驗動物中心提供。

保存于實驗室的糞腸球菌從 －８０ ℃的低溫冰箱中取出，于冰上溶解。并在超凈 工作臺中使用接種環挑取菌液在 ＢＨＩ固體平板培養 基上四區劃線，倒置于３７℃恒溫培養箱１８ｈ～２４ｈ。

挑取平 板上培養出來的單個菌落，無 菌 接 入５００ ｍＬ 滅 菌 的裝有 ＢＨＩ液體培養基的錐形瓶中，置 于３７ ℃搖 床中培養１２ｈ。將 菌 液 無 菌 操 作 分 裝 入５０ｍＬ 的 離心管中，于４ ℃、８０００ｒ／ｍｉｎ離心８ｍｉｎ，收集菌 體并用滅 菌 的 ＰＢＳ沖 洗 菌 體，重 復２次，最 后 將 所 有菌體收集于１個５０ｍＬ的離心管中，用４０ｍＬ的 ＰＢＳ緩沖液懸浮，置于４ ℃保存備用。

準備８個無菌的１．５ｍＬ 的 ＥＰ管，編號１～８，分別加入０．９ｍＬ滅菌的 ＰＢＳ 緩沖液，將 ＰＢＳ懸 浮 的 菌 液 充 分 振 蕩 混 勻，從 中 吸 取０．１ｍＬ菌液加入１號ＥＰ管中，振蕩混勻，再從１ 號 ＥＰ管中吸取０．１ｍＬ 菌液加入２號 ＥＰ管中，振 震蕩混勻，依次類推 做１０倍 倍 比 稀 釋，即 分 別 稀 釋 至１×１０－１、１×１０－２、１×１０－３、１×１０－４、１×１０－５、１ ×１０－６、１×１０－７、１×１０－８。分 別 從 １×１０－６、１× １０－７、１×１０－８ ３個 稀 釋 度 的 ＥＰ 管 中 吸 取０．２ ｍＬ 菌液加入 ＢＨＩ固 體 平 板 上，用涂布棒涂布均勻，每 個梯度涂３個平板，倒置于３７ ℃恒溫箱里培養一定 的時間，記錄每個平板上的菌落數，菌 落 個 數 在３０ 個～３００個的平板計數有效。然后取有效計數值的 平均數根據公式（每毫升中總活菌數＝同 一 稀 釋 度 ３次重復的菌落平均數×稀釋倍數×５）計算得出所 培養細菌每毫升中的細菌數。

ＬＤ０、ＬＤ１００的 測 定 根據文獻方 法，以６只 昆 明 小 鼠 為１組， 分別 腹 腔 注 射 ０．３ ｍＬ 菌 液，含 菌 量 為 ３．３× １０８ ＣＦＵ，記錄３ｄ內 小 鼠 的 死 亡 情 況，如 果 小 鼠 全 部存活，劑量增加０．１×１０８ ＣＦＵ，若２只或２只以上 的小鼠死亡，則 劑 量 減 小０．１×１０８ ＣＦＵ，直 至 確 定 一組中只有１只昆明系小鼠 死 亡，則 與 此 劑 量 相 鄰 的低劑量即為 ＬＤ０，按 照 同 樣 的 方 法 給 另 一 組 小 鼠注射含菌量 為２．０×１０９ ＣＦＵ，如 果 全 部 死 亡，則 減 少劑量０．１×１０９ ＣＦＵ，若有２只或２只以上存活，則 增加劑量０．１×１０９ ＣＦＵ，直至確定只有，１只小鼠存 活的劑量，則與此相鄰的最高劑量即為 ＬＤ１００。最終 測 得 ＬＤ０ 為 ４．９×１０８ ＣＦＵ，ＬＤ１００ 為 １．０５× １０９ ＣＦＵ。

通過菌 落 計 數，稀 釋 倍 數 為１０－７時，平 板 上 菌 落數分別為３１、３３、３５，平均為３３個，根據公式（每毫 升中總 活 菌 數＝同一稀釋度三次重復的菌落平均 數×稀 釋 倍 數 ×５）計 算 出 菌 液 濃 度 為 ３．３×１０９ ＣＦＵ／ｍＬ。腹腔注射小鼠后，臨床癥狀表現為精神萎靡、食欲 減退、閉目不睜、喜臥扎堆，可在４８ｈ內死亡，７２ｈ后存 活的小鼠逐漸恢復正常，癥狀消失。對死亡小鼠剖檢， 發現腦部水腫，肝臟腫大呈暗黃色，肺臟水腫。腦組織中細菌的回收鑒定 糞 腸 球 菌 感 染 小鼠后，從腦組織和內臟組織中分離得到的細菌在 ＢＨＩ瓊脂平板上生長良好，形態大小基本一致，為乳 白色的表面 光 滑、整 齊 的 小 菌 落（圖１）。細 菌 經 革 蘭染色，可以觀察到呈單個、成對或者短鏈狀排列的 革蘭陽性球菌。綜合糞腸球菌感染小鼠后的死亡情況，腦 組 織 的病理變化結果，認為２／３ＬＤ５０劑量作為建立糞腸 球菌感染小鼠模型的最佳劑量較為合適。

糞腸球菌是一 種 革 蘭 陽 性 球 菌，為 人 和 動 物 腸 道內的正常 菌 群，通常不引起發病，當 機 體 的 免 疫力低下時，糞腸球菌可能會趁虛而入，變成致病菌 侵入機體，造 成 感 染 引 發 疾 病。近 年 來，越 來 越 多的病例報道表明，腸球菌不僅可以引起尿道感染、 心內膜 炎 等，還可以引起敗血癥和腦膜炎，狄 婷 婷報道，糞腸球菌可致雛鵝或青年鵝發生昏睡、 持續性下痢、跛行和癱瘓為主要癥狀，以敗血癥為主 要病理特征的傳染性疾病；劉艷等報道糞腸球菌 感染一名５歲 女 童 發 生 化 膿 性 腦 膜 炎；齊 亞 銀 等 報道羔羊腦膜炎中分離出了糞腸球菌１１株，并在小 鼠的回歸試驗中檢測到分離 菌，腹 腔 注 射 小 鼠 后 均 能對其造成與發病羊相同的癥狀，包括精神沉郁、呼 吸急促、有 神 經 癥 狀，腦 部 出 血、水 腫 等。據 Ｃｏｑｕｅ Ｔ Ｍ 等報道，由糞腸球菌引起醫院內的尿路感染 患病率為１６％，僅次于大腸埃希菌；在引起心內 膜炎的醫院院內腸球菌感染中，有 ９３％ 為 糞 腸 球 菌；引起敗血癥的腸球菌，８７％為糞腸球菌，但關于腸球菌引起動物腦炎、腦膜炎的病例少有報道，其 致病機制尚不明確，因此也給腸球菌的治療和預防 帶來了困難。