電子天平（北京賽多利斯儀器有限公 司）、KDC-16HR 高速低溫離心機(jī)（科大創(chuàng)新股份有 限公司）、202-1 型電熱恒溫干燥箱（天津市泰斯特儀 器有限公司）、CX41 光學(xué)顯微鏡（日本 OLYMPUS 公 司）、JEM-1220 型透射電鏡（日本電子有限公司）、 HPIAS-1000 高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)（武漢同 濟(jì)醫(yī)科大學(xué)千屏影像工程公司）。352 型酶標(biāo)儀（芬蘭 Labsystems Multiskan MS）、AC8 洗板機(jī)（芬蘭 Thermo Labsystems）、電熱恒溫干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、超純水儀（美國(guó) Millipore，Milli-Q）、 凝膠成像儀（上海天能科技有限公司 Tanon-2500）、 垂直電泳儀及轉(zhuǎn)膜系統(tǒng)（美國(guó) Bio-Rad 公司）、高速 低溫離心機(jī)（德國(guó) Sigma-3-18K）、精密天平（瑞士 Mettler-Toledo，AB265-S）、DU-460 紫外分光光度儀 （美國(guó) Beckman 公司）、實(shí)時(shí)熒光定量 PCR（美國(guó) Bio-Rad 公司 CFX96）。水合氯醛（上海山浦化工有 限公司，批號(hào) 160209）、烏拉坦（上海山浦化工有限 公司，批號(hào) 151220）。腫瘤壞死因子 -α（TNF-α）、 IFN-β 酶聯(lián)免疫試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所有 限公司，TGF-β1、 TNF-α 一抗購(gòu)自北京博奧森生物技 術(shù)有限公司。總 RNA 提取試劑 Trizol，反轉(zhuǎn)錄試劑盒 （大連寶生物有限公司），SYBR Green 熒光定量 PCR 試劑盒（HaiGene, A2201），超敏ECL發(fā)光液（HaiGene， M2301）。兔抗人，鼠 TLR2 多克隆抗體（武漢博士 德生物技術(shù)有限公司），羊抗兔 HRP 標(biāo)記二抗（金斯瑞，A00098）。引物由大連寶生物有限公司合成，其 他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。膈下逐瘀湯加減方（GD）： 赤芍 10 g，牡丹皮 5 g，桃仁 5 g，川芎 5 g，枳殼 5 g， 延胡索 10 g，香附 10 g，烏藥 5 g，地龍 5 g，鱉甲 5 g。 （由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)中草藥房提供）。康婦炎膠囊 （山東步長(zhǎng)神州制藥有限公司，150530，服用方法：1 次 3 粒，1 d 2 次）。雌性 SD 大鼠，SPF 級(jí)，8 ～ 12 周， 體質(zhì)量（200±20）g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 中心提供，許可證編號(hào)：SCXK（黑）2015-004。保持 飼養(yǎng)環(huán)境溫度 22 ℃，相對(duì)濕度 40% 左右，標(biāo)準(zhǔn)大鼠 飼料喂養(yǎng)，自由飲水，適應(yīng)環(huán)境 1 周之后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

將 35 g 牛肉湯培養(yǎng)基加入 到 1 000 mL 的蒸餾水中溶解，分別培養(yǎng)在 5 個(gè)錐形瓶 中，每瓶加玻璃球 30 個(gè)，121 ℃滅菌 20 min，放冷， 取斜面保存的金黃色葡萄球菌菌種，用無(wú)菌蒸餾水溶 解，在超凈工作臺(tái)下接種至新配制的液體培養(yǎng)基中， 于 28 ℃，110 r/min，搖床培養(yǎng) 24 ～ 48 h，得到菌液即 可使用。

雌性 SD 大鼠，104 只，隨 機(jī)分為 8 組，分別為空白組（K）、手術(shù)組（S）、 模型組（M）、復(fù)合模型組（F），中成藥組（C）， 中藥低、中、高劑量組（D、Z、G），每組 13 只。 于實(shí)驗(yàn)第 1 天，除 K 組外，其余各組以 10% 水合氯 醛按 0.04 mL/kg 腹腔注射麻醉后，將大鼠側(cè)臥式平放， 剃毛并用碘伏進(jìn)行消毒，取肋緣過(guò)腎區(qū) 0.5 cm 近脊柱 側(cè)旁開(kāi) 1 cm 長(zhǎng)的橫切口，打開(kāi)腹腔，撥開(kāi)其他組織， 暴露一側(cè)卵巢、輸卵管及部分子宮，M 組、F 組均向 輸卵管方向注入已配好的 4×109 /mL 金黃色葡萄球菌 懸液 0.1 mL，后逐層縫合腹壁肌層、皮膚，再以 75% 的乙醇消毒切口，另一側(cè)輸卵管同樣方法操作，S 組 只手術(shù)不注菌，注入等劑量生理鹽水。于實(shí)驗(yàn)第 8 天，復(fù)合模型組（F）給予大鼠不可預(yù)知的 慢性長(zhǎng)期刺激，包括大鼠足底 25 ～ 35 V 的電擊刺激， 每隔 8 ～ 15 min 進(jìn)行 1 次，每次 60 ～ 120 s，持續(xù) 10 ～ 12 h；頻率為 5 ～ 15 KHz 的噪聲刺激（等級(jí)為 3 級(jí)），每隔 8 ～ 15 min 進(jìn)行 1 次，每次 60 ～ 120 s， 持續(xù) 10 ～ 12 h；頻率為 1 ～ 3KHz 強(qiáng)度的閃爍光刺 激，每隔 8 ～ 15 min 進(jìn)行 1 次，每次 60 ～ 120 s，持 續(xù) 10 ～ 12 h；夾尾每小時(shí) 1 次，每次 4 min，8 次 /d； 45°傾斜鼠籠 2 h，每日 1 次；連續(xù) 21 d。

與空白組相比，模型及復(fù)合模型組的 IFN-β、TNF-α 表達(dá)提升均極度顯著（P ＜ 0.01），說(shuō) 明慢性輸卵管炎大鼠造模成功；與模型組相比，復(fù)合 模型組提升亦顯著（P ＜ 0.05），說(shuō)明氣滯血瘀型慢 性輸卵管炎大鼠造模成功，并優(yōu)于單獨(dú)注菌造模；與 復(fù)合模型組相比，中藥低劑量組有所降低（P ＜0.05）， 中藥中、高劑量組表現(xiàn)為極顯著性降低（P ＜ 0.01）， 中藥低、中、高劑量組較復(fù)合模型組均有下降趨勢(shì)。 2.2 氣滯血瘀型慢性輸卵管炎模型大鼠 TNF-α、 TGF-β1 表達(dá)。

慢性輸卵管炎作為輸卵管性不孕癥以及異位妊娠 的重要因素，對(duì)女性的生殖健康具有重要意義。現(xiàn)如 今西醫(yī)對(duì)其的治療以抗生素為主，但僅對(duì)急性期效果 顯著。而中藥學(xué)在本病的非急性期則體現(xiàn)出了其獨(dú)有 的優(yōu)勢(shì)，且經(jīng)現(xiàn)代藥理研究表明，膈下逐瘀湯加減方 中各藥物可起到活血化瘀、抗菌消炎、提高免疫力以 及改善微循環(huán)等作用 ，同時(shí)可降低臨床不適癥狀和 復(fù)發(fā)率。



 

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